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分析PCRmax實(shí)時(shí)熒光定量檢測儀的操作規程
更新時(shí)間:2020-06-09   點(diǎn)擊次數:1019次
  PCRmax實(shí)時(shí)熒光定量檢測儀是指通過(guò)熒光染料或熒光標記的特異性探針,對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標記跟蹤,實(shí)時(shí)監測反應過(guò)程的儀器。結合相應的軟件可以對產(chǎn)物進(jìn)行定性和定量分析,計算待測樣品模板的初始濃度。在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監測整個(gè)PCR進(jìn)程。

  1、開(kāi)機:
  a、依次打開(kāi)電腦顯示器和電腦主機的電源開(kāi)關(guān),進(jìn)入Windows界面;
  b、接著(zhù)打開(kāi)AB7500儀器電源開(kāi)關(guān),預熱10分鐘;
  c、點(diǎn)擊SDS軟件。
 
  2、檢測:
  a、選擇File-New-新建,在New Document Wizard窗口中,從Assay下拉列表中選擇反應類(lèi)型:相對定量,定量,等位基因鑒別或陽(yáng)性陰性實(shí)驗,從Container下拉列表中選擇反應板類(lèi)型,在Default Plate Name中輸入反應板文件名,點(diǎn)擊Next,選擇需要添加到反應板文件的探針,點(diǎn)擊Next,為每個(gè)孔探針和任務(wù),單擊Finish。
  b、在Well Inspector-View-Well Inspector中輸入樣品名。
  c、運行相應的反應類(lèi)型程序,選擇Instrument設定PCR條件。
  d、點(diǎn)擊Save下拉菜單下的Save As,輸入文件名,點(diǎn)擊save,關(guān)閉設置界面。
  e、按壓儀器托盤(pán)上的按壓位,待托盤(pán)彈出后,將所需檢測反應板放入檢測孔位,再次按壓托盤(pán)使其滑入儀器,點(diǎn)擊Start開(kāi)始檢測。
 
  3、結果分析:PCR反應結束后自動(dòng)保存結果,對擴增曲線(xiàn)進(jìn)行分析,選擇Analysis-Analysis Settings 選擇Auto Ct,軟件自動(dòng)為每個(gè)反應空生成基線(xiàn)和閾值,也可根據分析后圖像調節Baseline的Start值、End值,Threshold值,點(diǎn)擊Analyze進(jìn)行再次分析。
  4、關(guān)機:實(shí)驗結束后取出反應管,順序關(guān)閉AB7500軟件、定量PCR儀電源,關(guān)閉電腦。
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