上海默西科學(xué)儀器有限公司

　　PCRmax實(shí)時(shí)熒光定量檢測儀是為應對多元化、高復雜使用環(huán)境而開(kāi)發(fā)的一款便攜式熒光定量PCR儀。本品采用了16單管聯(lián)管模式的小容量設計，及可對應電池供電功能等，以換取小巧便攜的特點(diǎn)。同時(shí)，采用定制版帕爾貼模塊、全新光路設計以及頂部掃描等。 

　　技術(shù)原理：

　　所謂PCR技術(shù)，是指在PCR反應體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實(shí)時(shí)監測整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在技術(shù)的發(fā)展過(guò)程中，兩個(gè)重要的發(fā)現起著(zhù)關(guān)鍵的作用：1、在90年代早期，TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現，它能降解特異性熒光記探針，因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能；2、此后熒光雙標記探針的運用使在一密閉的反應管中能實(shí)時(shí)地監測反應全過(guò)程。這兩個(gè)發(fā)現的結合以及相應的儀器和試劑的商品化發(fā)展導致PCR方法在研究工作中的運用。

 

　　PCR反應過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數是呈指數方式增加的，隨著(zhù)反應循環(huán)數的增加，最終PCR反應不再以指數方式生成模板，從而進(jìn)入平臺期。在傳統的PCR 中，常用凝膠電泳分離并用熒光染色來(lái)檢測PCR反應的最終擴增產(chǎn)物，因此用此終點(diǎn)法對PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處。在real-time Q-PCR中，對整個(gè)PCR反應擴增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的監測和連續地分析擴增相關(guān)的熒光信號，隨著(zhù)反應時(shí)間的進(jìn)行，監測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲 線(xiàn)。在PCR反應早期，產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區別，而后熒光的產(chǎn)生進(jìn)入指數期、線(xiàn)性期和最終的平臺期，因此可以在PCR反應處于指數期的某一點(diǎn) 上來(lái)檢測PCR產(chǎn)物的量，并且由此來(lái)推斷模板最初的含量。為了便于對所檢測樣本進(jìn)行比較，在real-time Q-PCR反應的指數期，首先需設定一定熒光信號的域值，一般這個(gè)域值是以PCR反應的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號，熒光域值的缺省設置是3～15個(gè)循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍。如果檢測到熒光信號超過(guò)域值被認為是真正的信號，它可用于定義 樣本的域值循環(huán)數（Ct）。Ct值的含義是：每個(gè)反應管內的熒光信號達到設定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數。研究表明，每個(gè)模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的 對數存在線(xiàn)性關(guān)系，起始拷貝數越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線(xiàn)，因此只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標準曲線(xiàn)上計算出該樣 品的起始拷貝數。